2023-03-04
一、盂唇结构简介
盂唇是一种紧紧附着在关节窝边缘的纤维结构，亦为盂韧带，起到了增大关节窝与肱骨头或股骨头之间接触面积的作用，主要由纤维软骨或者致密结缔组织所组成；盂唇的横切面呈现三角形，底部固定于关节腔，而其自由面薄且尖。盂唇的内表面被滑膜所覆盖，外表面则与关节囊相连接，且盂唇会随着骨头的旋转进行调整，从而增加了关节窝边缘的灵活性；而关节附近的肌肉则加强了盂结构的稳定性。盂唇组织的体积会发生变化，前唇更厚，且有时比后唇更大。 盂唇组织组织解离主要难点在于，组织主要由纤维组成，组织紧密且具有一定的韧性，这导致了酶无法有效的对组织进行消化从而延长了解离时间，进而对组织解离程度的判断也有一定要求，需要灵活的把握时间，同时对于此类长时间消化的样本，应缓慢的逐步进行，避免突然改变细胞环境造成的细胞应激。接下来小派为大家分享实验方案并展示结果。
二、人盂唇组织解离方案 人盂唇组织 1.实验试剂配置：（1）适当体积复合酶液 （2）含2% FBS的DPBS，冰上预冷 （3）完全培养基：含10% FBS的DMEM 2.预处理：从组织保存液中取出组织样本，放入预冷的 DPBS中清洗一到两遍，使用眼科剪将组织尽可能的剪切成1~2mm³，用预冷的DPBS清洗组织块。 3.组织消化：将剪碎的组织转移至复合酶液中，置于37℃水浴中振荡消化20min，用巴士吸管吹打8-10次后继续消化20min（该操作重复2次），共计消化60min，完全培养基终止消化，过30um细胞筛收集悬液，置于冰上暂存。 4裂红：将细胞悬液4℃ 400×g 离心5 min，弃上清，加入2mL体积1X RBC，室温放置3min，加入适量DPBS终止，4℃ 300×g 离心5 min。 5清洗：离心后弃上清，加入3mL DPBS重悬沉淀，4℃ 300×g 离心5 min。弃上清，用适量DPBS(含2% FBS)重悬细胞，进行荧光计数及台盼蓝镜检，调整浓度至700-1200cells/ul后上机。 （若离心重悬后出现活率不足80%，需要进行去除死细胞处理。若出现碎片较多，则需要进行去碎片操作。）
三、结果展示 活性、浓度检测 96%活率，浓度1030个cells/ul，总量6W左右。 数据质控 上图是下机数据cellranger质控结果，细胞捕获数及基因数都符合前期需求。
