2024-05-17
PART.01、坐骨神经结构简介
坐骨神经是动物全身最长最粗大的神经，在腘窝分为内侧的胫神经和外侧的腓总神经。自梨状肌下孔出骨盆后，其总干和终支延伸在整个下肢背侧。总干位于臀大肌深面，经股骨大转子和坐骨结节之间，下降至股骨背侧，分支至大腿背侧肌群。
坐骨神经既是股后群肌、小腿和足肌的运动神经，也是小腿和足的重要感觉神经。接下来小派为大家分享实验方案并展示结果。
PART.02、小鼠坐骨神经解离方案
小鼠坐骨神经
1、实验试剂配置
（1）适当体积复合酶液
（2）含2% FBS的DPBS，冰上预冷
（3）完全培养基：含10% FBS的DMEM，冰上预冷
2、预处理
从组织保存液中取出组织样本，放入预冷的 DPBS中清洗一到两遍，转移至少量复合酶液中，使用眼科剪将组织尽可能剪碎。
3、组织消化
补充酶液至一定体积，置于37℃水浴中振荡消化10-15min，用巴氏吸管反复吹打多次后观察组织，若仍有剩余则继续消化5-10min，直至组织完全消化，加入等体积的完全培养基终止消化，过30um细胞筛收集悬液。
4、裂红
将细胞悬液4℃ 500×g 离心5 min，弃上清，加入2-3mL 体积的1X RBC，室温放置2min，加入适量DPBS（含2%FBS）终止，4℃ 500×g 离心5 min。
5、清洗
离心后弃上清，加入3mL DPBS（含2%FBS）重悬沉淀，4℃ 500×g 离心5 min。弃上清，用适量DPBS(含2% FBS)重悬细胞，进行荧光计数及台盼蓝镜检，调整浓度至700-1200cells/ul后上机。
（若离心重悬后出现活率不足80%，需要进行去除死细胞处理。若出现碎片较多，则需要进行去碎片操作。）
PART.03、结果展示
活性、浓度检测
92%活率，浓度600 cells/ul，总量5W左右。
镜检结果
悬液背景干净，无明显杂质
数据质控
上图是下机数据cellranger质控结果，细胞捕获数及基因数都符合前期需求。
