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高通量qPCR芯片推出极速周期——基因丰度唾手可得!

2024-07-01

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高通量qPCR芯片极速周期

只需15个工作日!

即可完成一张芯片5184个纳升级qPCR反应!



产品介绍

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实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR)是20世纪90年代发展起来的一种准确、快速的核酸定量分析技术,通过在PCR反应体系中引入一种荧光化学物质,对PCR扩增反应中每一个循环产物的荧光信号进行实时检测,得到一条荧光扩增曲线图,以此实验对初始模板的定量分析。

高通量qPCR技术是对传统qPCR技术的一次突破性升级。高通量qPCR技术将针对目的基因设计的对应qPCR引物包装至薄层金属合金纳米孔芯片得到高通量qPCR芯片,通过SmartChip超高通量荧光定量PCR系统完成。该系统每次能够并行5184个纳升级qPCR反应,可对多个样本进行高通量、高效性、高精确性和高灵敏度的目的基因检测和定量,规避了传统qPCR方法的基因检测单一、费用成本高和效率低等缺点。



绝对定量芯片——针对微生物群体样本

绝对定量芯片主要针对微生物群体样本,包括抗生素抗性基因芯片、重金属抗性基因芯片、微生物功能基因芯片等。针对群体样本中的细菌与古菌,以16S rRNA作为内参,使用SmartChip超高通量荧光定量PCR系统,可以快速对大批量样本的特定研究方向的相关基因进行高效准确的基因定量。

相对丰度计算

以16S rRNA作为内参,参照以下公式进行数据计算:

(1) 相对拷贝数=10^(31-Ct)/(10/3)

(2) 基因相对丰度=基因相对拷贝数/16S rRNA相对拷贝数

(3) 对Ct值数据进行标准化,得到各基因在各样本中的相对丰度信息。

绝对丰度计算

使用16S 扩增的PCR产物构建标准质粒。使用Roche仪器进行qPCR检测,制作标准曲线。代入各样品对应的16S rRNA Ct值数据,对各样品的16s rRNA基因进行绝对定量。通过公式:16SrRNA相对丰度/16S rRNA绝对定量=基因相对丰度/基因绝对定量,换算即可获得其他基因的绝对定量信息。

实验流程

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生信分析流程

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生信分析流程

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相对定量芯片——定量差异表达基因

相对定量芯片主要定量不同个体样本中的差异表达基因。选择合适的内参基因,使用SmartChip超高通量荧光定量PCR系统,可以快速对大批量样本的大量基因进行高效准确的相对定量。

采用 2-△△Ct 分析方法,比较基因的差异表达水平 

(1)内参基因均一化样本差异 

△Ct=Ct 目的基因-Ct 内参基因 

(2)其他样本和对照本比较 

△△Ct=△Ct 实验组-△Ct 对照组。

(3)基因差异表达水平计算

使用2-△△Ct 公式计算基因表达水平差异


实验流程

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由于做相对定量芯片的引物和样本种类较复杂,我们一般在引物合成后,使用常规qPCR仪器将随机部分样本混样进行预实验,确认引物的特异性与CT值,并确定上机程序。预实验正常后,进行芯片上机。相对定量芯片的数据为不同样本基因相对于对照组的表达量差异倍数,后续可根据需求制作相对定量热图、柱状图等。

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通过高通量qPCR系统,不论是群体样本绝对定量,还是个体样本相对定量,都可以在短时间内对大批量样本的大量基因进行高效准确的定量!

高通量qPCR芯片急速周期,只需15个工作日,即可完成一张芯片5184个纳升级qPCR反应!更短的周期!更低的成本!更完美的体验!基因丰度唾手可得!

心动不如行动,赶快行动起来吧!


基因工程产品目录


基因定量服务

高通量qPCR芯片、常规相对定量(mRNA,microRNA,lncRNA,circRNA,外泌体定量等)、常规绝对定量(微生物多样性、功能基因)

SNP分型服务

Kasp法、Sanger测序法、SNaPshot法

PCR重测序服务

物种鉴定、目的基因扩增测序、PCR产物测序

基础分子生物学服务

引物合成、标记探针引物合成、一代测序、PCR扩增

表观遗传研究

甲基化BSP检测

毛细管电泳分型服务

SSR引物开发、微卫星多态性分析、MSI检测、STR跑板、细胞系鉴定

分子克隆服务

全基因合成、PCR克隆、TA克隆、定点突变、RNA合成

蛋白互作验证服务

核体系酵母单杂/双杂、膜体系酵母双杂、点对点验证

蛋白测定服务

酶联免疫吸附(Elisa)