2025-02-28
一、牙龈组织：口腔健康的隐形卫士与生命科学的新蓝海
当清晨刷牙时的一抹血色成为现代人的健康警报，当牙周炎悄然成为全球第六大流行疾病，人类终于将目光投向这片守护牙齿的"生命土壤"——牙龈组织。这个仅有几毫米厚的精密构造，不仅是牙齿的天然防护罩，更是人体免疫系统与微生物群落激烈博弈的前沿阵地。
在微观世界，牙龈组织展现着令人惊叹的时空秩序。游离龈如灵动的哨兵环绕牙颈，附着龈以坚韧的胶原网络扎根牙槽骨，龈乳头则在齿缝间编织精密防护网。这种三维结构的形成，源于胚胎期外胚层与神经嵴细胞的精密对话，是生命进化赋予人类的智能防护系统。
每平方毫米牙龈组织中，约5000个上皮细胞构筑物理屏障，其表面角蛋白网络如分子筛般过滤致病菌。基底层的成纤维细胞持续分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原，构建动态更新的细胞外基质。当菌斑生物膜突破防线，中性粒细胞以每分钟3万个的速度从龈沟液中涌出，树突状细胞则向深部组织传递危险信号，启动免疫级联反应。
传统组织学研究曾将牙龈视为均质结构，而今单细胞转录组技术正揭开其神秘面纱。这项技术如同给每个细胞装上"分子录音笔"，能同时捕获上万细胞的基因表达图谱。在牙龈微环境中，我们不仅能定位特定信号通路的空间热点，还能发现具有多向分化潜能的间充质干细胞亚群，这些发现正在改写牙周再生医学的底层逻辑。
当我们凝视这片维系口腔健康的"生命绿洲"，单细胞转录组学恰似一束高能激光，穿透组织均质化的认知迷雾。在基因表达的星海图谱中，每个细胞都在诉说独特的生命故事，这些故事终将编织成破解牙周疾病奥秘的密码，为千万受困于牙龈问题的人们点亮希望之光。
二、人牙龈组织解离方案
牙龈组织
1.实验试剂配置：（1）适当体积复合酶液 （2）含2% FBS的DPBS，冰上预冷 （3）完全培养基：含10% FBS的DMEM，冰上预冷
2.预处理：从组织保存液中取出组织样本，放入预冷的 DPBS中清洗一到两遍，转移至少量复合酶液1中，使用眼科剪将组织尽可能剪碎。
3.组织消化：补充酶液至一定体积，置于37℃水浴中振荡消化10-15min，用巴氏吸管反复吹打多次后观察组织；剩余组织转移至复合酶液2中继续消化5-10min，直至组织完全消化，加入等体积的完全培养基终止消化，过30um细胞筛收集悬液。
4.裂红：将细胞悬液4℃ 500×g 离心5 min，弃上清，加入2-3mL 体积的1X RBC，室温放置2min，加入适量DPBS（含2%FBS）终止，4℃ 500×g 离心5 min。
5清洗：离心后弃上清，加入3mL DPBS（含2%FBS）重悬沉淀，4℃ 500×g 离心5 min。弃上清，用适量DPBS(含2% FBS)重悬细胞，进行荧光计数及台盼蓝镜检，调整浓度至700-1200cells/ul后上机。
（若离心重悬后出现活率不足80%，需要进行去除死细胞处理。若出现碎片较多，则需要进行去碎片操作。）
三、结果展示
活性、浓度检测
96%活率，浓度1250 cells/ul，总量15W左右。
镜检结果
悬液背景干净，细胞形态完整，无明显杂质
数据质控
上图是下机数据cellranger质控结果，细胞捕获数及基因数都符合前期需求。
