2025-07-21
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1、ELISA 可检测血清、血浆、细胞培养上清等多种样本，类型丰富适用广。
2、样本处理需按类型针对性操作，血清、血浆、组织匀浆等各有处理要点，细节影响结果。
3、样本保存有讲究，短期 2-8℃、长期需冷冻且要避免反复冻融，同时检测用量因样本类型而异。
ELISA技术凭借其灵敏度高、特异性强的特点，成为实验室里蛋白定量检测的“常青树”。然而，许多实验失败或结果偏差的源头，往往不在复杂的操作步骤，而在于最开始的环节——样本准备。
一、常见ELISA检测样本类型
ELISA的适用性极广，能检测的样本类型丰富多样，主要包括：
1. 血清： 最常用的样本类型之一。
2. 血浆： 血液加入抗凝剂（如肝素、EDTA、柠檬酸钠）后离心获得的上清液。
3. 细胞培养上清液： 培养细胞分泌到培养基中的可溶性因子（如细胞因子、趋化因子、生长因子）
4. 组织匀浆液： 用于检测组织内的目标蛋白含量。
5. 尿液： 常用于检测特定激素、肿瘤标志物、感染标志物等。
6. 唾液、脑脊液、胸腹水等其他体液： 适用于特定研究或诊断目的。
二、样本处理：细节决定成败
不同的样本类型，处理方法各有侧重：
血清制备：
采集全血于不含抗凝剂的采血管中。
室温（22-25°C）倾斜放置 30-60分钟，待其充分凝固。
温和离心（推荐 1000-2000 xg，4°C，10-20分钟）。
小心吸取上层澄清血清，避免吸入红细胞或凝块。溶血、乳糜血（脂血）或纤维蛋白残留会严重影响结果！
血浆制备：
采集全血于含有合适抗凝剂的采血管中（务必确认抗凝剂兼容性）。
轻轻颠倒混匀数次，确保抗凝剂与血液充分混合。
温和离心（条件同血清），吸取上层澄清血浆。
细胞培养上清液：
收集培养液。
离心（通常 1000-2000 xg，4°C，10分钟）去除悬浮细胞和碎片。
立即检测或分装冻存。
组织匀浆液：
新鲜组织用预冷的PBS或生理盐水漂洗，去除血液。称重，剪成小块。
加入适量预冷的组织裂解缓冲液（通常含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂）。
在冰浴条件下进行机械匀浆（如匀浆器）或超声破碎。
高速离心（>10, 000 xg，4°C，10-30分钟）。
仔细吸取上清液（即组织匀浆上清），避免吸入沉淀或脂层。
尿液等体液：
通常需要离心去除不溶性颗粒。
根据目标物浓度和试剂盒要求，可能需要浓缩（如超滤离心）或稀释。
三、样本保存：时间与温度的博弈
样本保存不当是导致目标蛋白降解、聚集或活性丧失的常见原因。请遵循以下原则：
1. 短期保存（<24小时）： 处理好的样本（血清、血浆、上清液等）可暂时存放于 2-8°C（冰箱冷藏室）。
2. 长期保存（>24小时）： 必须冷冻保存。
-20°C： 适用于几周内检测的样本。对于稳定性较差的蛋白（如某些细胞因子），降解风险相对较高。
-80°C： 强烈推荐用于长期保存（数月甚至数年）。
3. 避免反复冻融。
四、检测所需样本量：心中有“数”
常见范围参考（具体务必以试剂盒为准）：
血清/血浆/细胞上清：通常起始检测体积在 50μL - 100μL 之间。有时需要稀释（如1:2, 1:5, 1:10甚至更高倍数）。
组织匀浆上清：因组织类型、裂解效率和目标物丰度差异巨大，体积变化范围很宽（可能从10μL到100μL不等）。
尿液：可能需要较大体积（如100μL或更多）或进行浓缩处理。
五、结 语
ELISA实验的基石，始于一份处理规范、保存得当、用量准确的样本。看似简单的样本准备环节，实则暗藏玄机，直接影响最终数据的可靠性、准确性和可重复性。在按下移液枪开始正式检测之前，请务必投入足够的时间和耐心，为你的ELISA实验准备好这份完美的“食材”。派森诺竭诚为大家提供各种属Elisa检测试剂盒，助力每一位生命科学实验室的科研人收获属于自己的完美实验结果，逐梦高分文章~
