2025-09-09
从人源样本到模式生物小鼠，前两期的单细胞解离技巧已帮大家避开不少坑；这一期，我们专门聚焦畜禽领域，拆解牛、羊、猪等动物组织的解离难点与解决方案！
派森诺单细胞平台已成功完成5000+单细胞样本测序，有着丰富的解离经验，以下是部分派森诺曾做过的畜禽动物组织样本类型：
一、先搞懂：畜禽动物组织解离的 3 大核心难点
不同于小鼠、人等模式生物，畜禽动物样本的解离难度往往更高，主要集中在这三点：
1. 个体差异显著：同一动物不同组织、同一组织不同生长阶段、不同品种的细胞密度、间质成分差异巨大，方案可重复性挑战大。
2. 结缔组织丰富：肌肉，真皮等组织纤维粗大，常规酶液难以渗透，导致细胞很难解离出来。
3. 杂质污染风险高：肠道、皮肤、乳腺等组织易携带细菌、饲料残渣、毛发等杂质，若解离时处理不当，会导致后续测序数据中杂菌序列占比超标，浪费成本。
二、实战指南：我们的经验合集
我们从上百个实战项目中，提炼出了这份宝贵的经验合集：
三、避坑宝典：常见问题及解决方案
1. 酶解时间过长：细胞活性骤降
解决方案：采用 “定时取样观察法”—— 孵育 20min 后，取少量组织用显微镜观察，当 80% 组织块分散成小团（而非完全单个细胞）时，立即加入含 10% FBS 的培养基终止反应（FBS 可抑制酶活性）。
2. 肌肉组织纤维残留：堵塞测序芯片
解决方案：采用 “二级过滤法”—— 先用 100 μm筛网过滤去除大块纤维，再用 40μm 细胞筛过滤残留细丝；若仍有纤维，可加入 0.1% 的胶原酶再次孵育 5min（温和去除残留纤维）。
四、部分项目经验展示
鸡胚胎性腺
活率：98.74% 浓度：959个/ul 总细胞量：95.9万
鸡卵黄囊
活率：99.55% 浓度：960个/ul 总细胞量：76.8万
绵羊胃上皮
活率：94.5% 浓度：1210个/ul 总细胞量：60.5万
绵羊肺
活率：94.63% 浓度：947个/ul 总细胞量：94.7万
猪肺
活率：96.63% 浓度：1250个/ul 总细胞量：125万
猪脾
活率：99.14% 浓度：1350个/ul 总细胞量：67.5万
猪海马体
活率：91% 浓度：1410个/ul 总细胞量：28.2万
猪颅骨
活率：87.5% 浓度：934个/ul 总细胞量：74.7万
鹅胸腺
活率：98.56% 浓度：1500个/ul 总细胞量：150万
