肠道是人体重要的消化器官，组织结构由内向外分为粘膜层，粘膜下层，肌层和固有层。这些不同的组织结构在消化、营养吸收、代谢和免疫调节中发挥着不同的作用。目前单细胞测序技术的飞速发展，为解析肠道细胞的异质性、揭示肠道疾病机制提供了强大的工具。今天，小编就来为大家分享肠道组织样本的解离方案，助力您的单细胞研究！
一、解离方案
1.样本处理
取出的肠道组织立即放入预冷的PBS中，纵向剪开，用预冷PBS清洗肠道内容物。然后转移至新的PBS中，在冲洗一遍，放入组织保护液中。
2.组织解离
配置两种酶液：
酶液Ⅰ：PBS+10mM EDTA+10mM HEPES
酶液Ⅱ：DMEM+1mg/ml 胶原酶Ⅱ+1mg/ml 胶原酶Ⅳ+20U/ml DNAse Ⅰ
首先使用酶液Ⅰ在37度水浴锅中消化15min，然后使用100um 滤膜过滤，此时过滤后的悬液大部分都是上皮细胞，然后滤膜上的组织再次使用酶液Ⅱ进行消化，37度消化30min，然后使用100um 滤膜过滤。两步过滤后的悬液合并，4度离心，300g 5min。
3.红细胞裂解
离心后弃上清，加入3ml红细胞裂解液，冰上裂解5min，使用DMEM+1%FBS 终止裂红，使用30um 滤膜过滤，4度离心，300g 5min。
4.清洗
弃上清，使用DMEM+1%FBS清洗，4度离心，300g 5min。
5.质检
弃上清，使用合适体积的DMEM+1%FBS重悬，AOPI计数，台盼蓝镜检细胞状态及碎片情况。
二、常见问题及解决方案
1.肠道样本线粒体基因占比高怎么办？
通过使用美天旎去死细胞磁珠去除可能正在凋亡的细胞
2.肠道微生物污染怎么办？
肠道微生物较多，可在解离前多冲洗几遍，后续解离中加抗生素
三、结果展示
活率：91.54% 浓度：1270个/ul 总细胞数：63.5万
活率：96.93% 浓度：995个/ul 总细胞数：15万
活率：89.25% 浓度：1080个/ul 总细胞数：54万
