一、组织结构简介

肌肉的组织结构分为结缔组织和肌纤维，结缔组织包括胶原蛋白、弹性纤维和少量的蛋白多糖和糖蛋白；肌纤维是肌肉的基本组成单位，主要由肌球蛋白和肌动蛋白组成。脂肪组织细胞构成包括成熟脂肪细胞和血管基质部分（包含脂肪源性干细胞、血管内皮细胞、周细胞、成纤维细胞和免疫细胞等）。

肌肉细胞直径10-100um，脂肪细胞直径20-200um，然而10x单细胞平台要求细胞直径小于40um，因此在进行肌肉组织和脂肪组织的单细胞悬液制备过程中，通常会损失肌肉细胞和脂肪细胞，如果您关注这一类细胞，我们更建议您做抽核后进行10x单细胞测序。接下来小派将为您介绍解离和抽核的不同处理方式。

二、实验步骤

1.肌肉和脂肪组织解离

使用无菌剪刀，将组织剪碎，并转移至配好的酶液中，脂肪组织应漂浮在溶液上方，37℃水浴锅消化30-40min，通过100um筛网去除大的杂质及组织，在4℃下离心（肌肉组织300-500g，脂肪组织800g）5min,弃上清，加入1ml裂红液，冰上裂解5min去除红细胞，加入10ml清洗液，并通过40um筛网，离心清洗，在4℃下离心（肌肉组织300-500g，脂肪组织800g）5min，弃上清，使用合适体积的重悬液重悬细胞，AOPI质检和台盼蓝镜检观察细胞数和细胞活率等。

2.肌肉和脂肪组织抽核

冷冻的组织液氮中敲碎，加入抽核裂解液，用组织研磨仪研磨，磨碎后冰上裂解2min，加入清洗液，过40um筛网，4度离心500g 5min清洗后，根据组织杂质情况，选择是否过流式去杂质处理。过流式后，4度离心500g 5min，使用合适体积的重悬液重悬，AOPI质检和台盼蓝镜检观察细胞核总数，细胞核完整度，碎片率等。

三、结果展示

肌肉解离

活率：99.52% 浓度：603个/ul 总细胞数：60300个

肌肉抽核

浓度：982个/ul 总细胞数：98200个

脂肪抽核

浓度：1760个/ul 总细胞数：528000个