2019-06-19
文案 | 转录调控事业部
随着现代生物学的发展，以组织或细胞群为研究对象，分析多种细胞的平均基因表达水平已经不能满足科研需求。单细胞转录组测序(Single cell RNA sequencing, scRNA-seq)是指在单个细胞水平对其mRNA进行高通量测序的一项新技术，原理是将分离的单个细胞中微量的mRNA通过扩增后再进行高通量测序。单细胞转录组测序能够有效解决组织样本细胞异质性以及被常规RNA-seq掩盖的细胞群内的转录组异质性难题，有助于发现新的稀有细胞类型，并深入了解细胞生长过程中的表达调控机制。
值此派森诺成立8周年之际，联合10x Genomics推出单细胞转录组整体解决方案。
基于10x Genomics ChromiumTM系统，利用油包水的微反应体系，通过序列标签（cell barcode和UMI）区别群体中的不同细胞和转录本，获得单细胞水平的基因表达谱，可实现数千甚至上万个单细胞群体分析，解决常规scRNA-seq方法在通量或扩展性方面存在的不足，为单细胞研究开拓新的思路。
派森诺优势
01 实验周期短
派森诺的技术人员，6分钟内快速完成上万个细胞封装，一天内完成80000个细胞的细胞悬液制备、单细胞捕获、扩增以及建库整个过程。
02 捕获效率高
可使单个细胞捕获效率高达65%，真实再现细胞的RNA表达情况。
03 专业分析快
派森诺的单细胞生信分析团队，从数据下机只需短短几天，即可完成全部分析内容，售后服务贴心。
04 项目经验多
多次成功完成动物细胞、植物细胞的单细胞测序；强势推动肿瘤细胞异质性、免疫细胞群体检测以及胚胎发育等研究。
技术原理
10x Genomics仪器小巧，但功能强大，具有通量高、灵活性强、流程简单、技术性能高、单个细胞制备成本低等优势，其技术核心是油滴包裹的凝胶珠(GEM)，该系统有75万种barcoded beads，每个bead上有40-80万探针。
利用8通道的微流体“双十字”交叉系统，将含barcode的凝胶珠（Gel Beads）、细胞和酶的混合物、油三者混合，形成GEMs。
GEMs形成后，细胞裂解，凝胶珠自动溶解释放大量barcode序列，随后mRNA逆转录产生带有Barcode和UMI信息的cDNA，再构建标准测序文库。
建库流程
油滴破碎，cDNA为模板进行PCR扩增，然后进行cDNA打断、加测序接头P5及测序引物R1等传统二代测序的建库过程单细胞转录组测序
10x Genomics单细胞转录组测序分析内容展示
01 分析流程
02 聚类分析
03 差异分析和富集结果
10x Genomics单细胞转录组测序样品要求
派森诺提供携带10x Genomics一起上门建库服务，由于10x Genomics对样本要求较高，各位师生可以提前样品检测：
样品总量：细胞悬浮液，一个样本细胞起始量约 5x105个；
样品浓度：7x105—1.2x106/ml；
细胞活性：活细胞数在 80% 以上；
细胞大小：小于 40 μm；
细胞培养基及缓冲液不能含有 Ca2+ 和 Mg2+ 等影响酶活性的物质；组织一般需要新鲜标本，不可冷冻，植物细胞需制成原生质体。
小贴士
1.样品来源可以是动物、植物等，组织和细胞都需要优化方案确保细胞解离成单细胞；
2.建议的洗涤方案是用含有0.04% BSA的1X PBS来沉淀和重悬细胞两次；
3.建议使用宽枪头重悬。
派森诺成立8周年，初心不变，始终以严谨的科学态度，成熟的测序技术，贴心的产品服务，和广大师生共同探索科研之路。
