2023-11-30
一、股骨结构简介
股骨又称为大腿骨，是人全身中最长的长骨，分一体两端，也是小鼠骨骼系统中最大的骨头之一，连接着髋关节与膝关节。其近侧端存在圆形股骨头，下方为狭细的股骨颈，股骨颈远侧还有两个大的突起分别为大转子和小转子提供肌肉附着处，继续下行为股骨体，末端向左右膨大，形成内外侧髁。
二、小鼠股骨组织解离方案
小鼠股骨
1.实验试剂配置
（1）适当体积复合酶液
（2）含2% FBS的DPBS，冰上预冷
（3）完全培养基：含10% FBS的DMEM
2.预处理
从组织保存液中取出组织样本，放入预冷的 DPBS中清洗一到两遍，使用眼科剪剪去近远两端暴露内腔，借助一次性医用注射器吸取DMEM冲洗内腔，收集骨髓（若要收集髓系细胞，可进行后续处理），剩余组织剪碎。
3.初次消化
将剪碎的组织转移至复合酶液中，置于37℃水浴中振荡消化30-40 min，过40um细胞筛收集悬液，置于冰上暂存。
4.二次消化
将上步过筛处理后剩余组织转入新管复合酶液继续消化30min，过40um细胞筛收集，置于冰上暂存。
5.三次消化
重复上步，计数仪测定细胞悬液浓度，无明显细胞量产出时，终止消化。
6.清洗
将所有细胞悬液合并后4℃ 400×g 离心5 min，弃上清，加入适当体积DPBS(含2% FBS)重悬沉淀，进行荧光计数及台盼蓝镜检。
（若离心后发现底部沉淀呈现红色，需要进行裂红处理）
三、结果展示
镜检结果
背景干净，形态完整。
活性、浓度检测
83%活率，浓度730个cells/ul，总量30W以上。
数据质控
上图是下机数据cellranger质控结果，细胞捕获数及基因数都符合前期需求。
