2024-01-15
一、股骨结构简介 ✦股骨又称为大腿骨，是人全身中最长的长骨，分一体两端，其近侧端存在圆形股骨头；股骨头极为重要，人的直立行走、活动劳动都要依靠股骨头的支撑作用。之前小派与大家分享了小鼠股骨的解离方法，相信大家肯定都收获颇丰吧！今天继续给大家带来人的股骨头解离实验方案及结果展示。 二、人股骨头组织解离方案 ✦ 人股骨头组织 1、实验试剂配置 （1）适当体积复合酶液 （2）含2% FBS的DPBS，冰上预冷 （3）完全培养基：含10% FBS的DMEM 2、预处理 从组织保存液中取出组织样本，放入预冷的 DPBS中清洗一到两遍，使用眼科剪将组织尽可能的剪切成1~2mm³，用预冷的DPBS清洗组织块。 3、初次消化 将剪碎的组织转移至复合酶液中，置于37℃水浴中振荡消化5 min，完全培养基终止消化，过30um细胞筛收集悬液，置于冰上暂存。 4、二次消化 将上步过筛处理后剩余组织转入新管复合酶液继续消化20min，完全培养基终止消化，过30um细胞筛收集，置于冰上暂存。 5、三次消化 重复上步，计数仪测定细胞悬液浓度，无明显细胞量产出时，终止消化。 6、清洗 将所有细胞悬液合并后4℃ 400×g 离心5 min，弃上清，加入适当体积DPBS(含2% FBS)重悬沉淀，进行荧光计数及台盼蓝镜检。 （若离心后发现底部沉淀呈现红色，需要进行裂红处理。若出现活率不足80%，需要进行去除死细胞处理。若出现碎片较多，则需要进行去碎片操作。） 三、结果展示 ✦镜检结果 背景干净，形态完整。 活性、浓度检测 94%活率，浓度645个cells/ul，总量20W以上。 数据质控 上图是下机数据cellranger质控结果，细胞捕获数及基因数都符合前期需求。
