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科研服务

Sanger测序

提供样品时请注意:

1、菌液

如果提供菌液来测序,请提供0.5ml以上的新鲜菌液,我们会为您培养并免费抽提质粒。 若您的菌株需要培养条件,或为噬菌体,您提供5ml新摇菌液的沉淀菌体,将沉淀菌体装在离心管中,用封口膜封好后交给我们的工作人员或邮寄给我们。这样我们可以直接抽提质粒进行测序。

2、质粒

如果您提供质粒来测序,请用质量较好的试剂盒抽提,以保证质粒的纯度可以达到全自动荧光测序的要求。提供质粒测序时,要求:浓度>100ng/微升,体积在10微升以上(对于每个样品只测一个反应的情况)。如果每个样品需测几个反应,则送样时需相应提高样品的量。请将质粒溶解在ddH2O中(请勿溶解在TE溶液中)。

注:无论您提供菌液或质粒,请您务必写明载体的名称、插入片段的大小和位置、选用的测序引物名称或序列,并且尽可能的标明测序引物距离插入片段的位置(请您注意测序引物及引物后会有20-50个碱基不能准确读出)。如果提供特殊测序引物,请一定写明引物浓度和序列,并且一定要提供高纯度的引物,浓度要大于5pmol/ul。

3、PCR产物

如果您提供PCR产物原液来测序,请确信PCR产物为单一扩增条带,片段大小在150—2000bp之间,且体积≥50ul,浓度≥50ng/ul。DNA总量必须大于2微克,由我们进行琼脂糖凝胶电泳割胶纯化,然后再来测序。小于150bp和大于2Kb的DNA片段请克隆后再测序。

如果您提供已经纯化后的PCR产物来测序,请您进行Agarose凝胶电泳纯化,然后用质量较好的试剂盒回收,将回收的DNA溶解在灭菌过的去离子水中(请不要溶解在TE中),并确信PCR产物为单一扩增条带。要求:浓度>50ng/微升,提供10微升以上(对于每个样品只测一个反应的情况)。如果每个样品需测几个反应,则送样时需相应提高样品的量。同时提供PCR引物,准确标明引物浓度,浓度要求大于5pmol/ul,并确信是高纯度的引物。

由于PCR产物测序相对较难,为得到较好的测序结果,送样时请尽量满足上述要求。