首页>科研服务>转录组学与蛋白代谢组学>表观基因组学>Cut&Tag-seq

科研服务

Cut&Tag-seq

常见问题

  • CUT&Tag技术应用?


    应用于表观遗传学领域的蛋白质与DNA互作研究

    研究转录因子在全基因组上的结合或分布位点

    研究组蛋白修饰在全基因组上的分布位点

    研究转录因子下游调控的靶基因


  • 抗体应该如何选择?


    CUT&Tag的数据产出主要取决于样本量、一抗特异性和一抗的靶点丰度。一抗需要客户提供商品化的ChIP级别的一抗原液, 项目结束后可寄还剩余一抗。如需公司提供二抗,则限定鼠/兔源的一抗,如无需使用公司二抗,则需要老师提供二抗。


  • CUT&TagChIP-seq,该如何选择?


    植物以外的物种,无论是组织样本还是细胞样本,推荐CUT&Tag ,相对来说CUT&Tag具有更高的成功率和信噪比;植物样本,推荐ChIP-seq。植物样本提核困难,不适合CUT&Tag


  • CUT&TagChIP-seq有什么区别?


    从建库流程角度,CUT&Tag要求的细胞起始量远低于ChIP-seq,不需要对样本进行甲醛交联,使用beads吸附活细胞的状态下先进行一抗孵育,后使用Tn5转座酶切割片段并添加接头,且无需后续的解交联步骤。即样本起始量、样本状态、抗体孵育、核酸片段化等步骤原理和ChIP-seq均不相同。从结果上看,CUT&Tag的数据信噪比更好,可重复性更好。


  • CUT&Tag实验的时候,阴性对照和阳性对照怎么设置,作用是什么?


    ChIP 不同,该实验方案不需要 input 样本,但需要添加阴性对照和阳性对照。针对抗体的阳性对照可以采用RNA Pol II/组蛋白,证明系统没有问题。阴性对照使用与一抗相同种属的IgG,阳性对照,阴性对照证明抗体特异,实验结果可信。

     


  • 客户有动物组织,建议消化成原代细胞送样还是将组织冻存送样?


    建议寄送冻存组织。CUT&Tag对细胞的活性要求较高,原代细胞通常活性偏低,冻存复苏后的细胞活性很难达到送样要求,建议将新鲜组织清理冻存,及时送样。


  • CUT&Tag接收样本的物种有什么要求?


    CUT&Tag适用于哺乳动物细胞的蛋白-DNA互作研究,酵母、植物等细胞需要经过(破除细胞壁或者提取细胞核)来进行实验。CUT&Tag在哺乳动物细胞系上的应用比较成熟,动物组织经过处理得到悬浮单个细胞同样可以进行实验。