简述真核转录组常规建库流程
1）通过磁珠和mRNA的polyA结构将mRNA分离出来；
2）mRNA片段化；
3）mRNA反转录为双链结构，第二链cDNA合成时，其中的碱基T，被替换成U，从而达到链特异性文库的目的；
4）5’末端修复、3’末端加A；
5）加接头；
6）选择特异长度回收，一般为300bp；
7）PCR；
8）上机测序。
如何对得到的数目较多的差异基因进行后期验证？
首先根据GO或者KEGG富集结果，或者客户关注的基因，选取有代表性的进行qRT-RCR验证。然后根据RPKM值，选择RPKM值差异倍数答，同时p值小的基因进行qRT-RCR验证。
